标准编号:	GB/T 23322-2018
中文名称:	纺织品 表面活性剂的测定 烷基酚和烷基酚聚氧乙烯醚
英文名称:	Textiles—Determination of surfactant—Alkylphenols and Alkylphenol ethoxylates
中标分类:	W04    基础标准与通用方法
行业分类:	GB    国家标准
ICS分类:	59.080.01 59.080.01    纺织产品综合 59.080.01
发布机构:	国家市场监督管理总局 国家标准化管理委员会
发布日期:	2018-12-28
实施日期:	2019-7-1
标准状态:	valid
替代旧标准:	GB/T 23322-2009 纺织品 表面活性剂的测定 烷基酚聚氧乙烯醚
翻译语言:	英文
文件格式:	PDF
中文字符数:	29000 字
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Codeofchina.com is in charge of this English translation. In case of any doubt about the English translation, the Chinese original shall be considered authoritative. This standard is developed in accordance with the rules given in GB/T 1.1-2009. This standard replaces GB/T 23322-2009 Textiles—Determination of surfactant—Alkylphenol ethoxylates, and the following main technical changes have been made with respect to GB/T 23322-2009: ——the standard is renamed as "Textiles—Determination of surfactant—Alkylphenols and alkylphenol ethoxylates"; ——the CAS Nos of standard substances are added (see 4.9, 4.10, 4.11 and 4.12); ——the analytical method of alkylphenol is added; ——the liquid chromatography-mass spectrometry (LC-MS) method is added; ——the method for calculation and expression of results is modified; ——the hydrophilic interaction liquid chromatography (HILIC) method is added in the annex; ——the reversed phase high-performance liquid chromatography (RP-HPLC) method and normal phase high-performance liquid chromatography (NP-HPLC) method are moved from the text to Annex A and Annex B. This standard was proposed by China National Textile and Apparel Council. This standard is under the jurisdiction of the National Technical Committee on Textiles of Standardization Administration of China (SAC/TC 209). The previous edition of this standard is as follows: ——GB/T 23322-2009. Textiles—Determination of surfactant— Alkylphenols and alkylphenol ethoxylates Warning: Persons using this standard shall be familiar with normal laboratory practice. This standard does not purport to address all of the safety problems, if any, associated with its use. It is the responsibility of the user to establish appropriate safety and health practices and to ensure compliance with any national regulatory conditions. 1 Scope This standard specifies the detection of alkylphenol (AP) and alkylphenol ethoxylates (APnEO, n = 2–16) in textiles by liquid chromatography-mass spectrometry (LC-MS) method. This standard is applicable to various textiles. Note 1: The general molecular structural formula of AP is R—C6H4—OH. In this standard, AP refers to common octylphenol [OP, C8H17—C6H4—OH] and nonylphenol [NP, C9H19—C6H4—OH]. The general molecular structural formula of APnEO is R—C6H4—(OC2H4)nOH. In this standard, APnEO refers to common octylphenol ethoxylates [OPnEO, C8H17—C6H4—(OC2H4)nOH] and nonylphenol ethoxylates [NPnEO, C9H19—C6H4—(OC2H4)nOH]. Note 2: See Annex A, Annex B and Annex C for the determination of AP and APnEO by reversed phase high-performance liquid chromatography (RP-HPLC) method, normal phase high-performance liquid chromatography (NP-HPLC) method and hydrophilic interaction liquid chromatography (HILIC) method, respectively. 2 Normative references The following referenced documents are indispensable for the application of this document. For dated references, only the edition cited applies. For undated references, the latest edition of the referenced document (including any amendments) applies. GB/T 6682 Water for analytical laboratory use—Specification and test methods 3 Principle Perform ultrasonic extraction of AP and APnEO from samples using methanol, carry out determination of the extracts using liquid chromatography-mass spectrometer after concentration and purification, and quantify the extracts by external standard method. 4 Reagents or materials 4.1 Unless otherwise specified, all reagents used in this method are analytically pure, and the water is Grade I water as specified in GB/T 6682. 4.2 Methanol (Grade HPLC). 4.3 Acetonitrile (Grade HPLC). 4.4 n-hexane (Grade HPLC). 4.5 Isopropanol (Grade HPLC). 4.6 Dichloromethane (Grade HPLC). 4.7 Methanol-water solution (3+2): accurately measure 300 mL of methanol (4.2) and 200 mL of water, and mix them evenly for later use. 4.8 Methanol-dichloromethane solution (1+4): accurately measure 100 mL of methanol (4.2) and 400 mL of dichloromethane (4.6), and mix them evenly for later use. 4.9 Octylphenol standard (OP, CAS No. 140-66-9, purity ≥ 97%). 4.10 Nonylphenol standard (NP, CAS No. 25154-52-3, guaranteed reagent). 4.11 Octylphenol ethoxylates standard (OPnEO, CAS No. 9002-93-1, average degree of polymerization n = 9, guaranteed reagent). 4.12 Nonylphenol ethoxylates standard (NPnEO, CAS No. 9016-45-9, average degree of polymerization n = 9, purity ≥ 99%). 4.13 Standard stock solution: accurately weigh an appropriate amount of OP (4.9), NP (4.10), OPnEP (4.11) and NPnEO (4.12) respectively, and prepare single-component standard stock solutions with a concentration of 10 mg/mL with methanol. 4.14 Standard working solution: take appropriate amount of OP, NP, OPnEO and NPnEO standard stock solutions (4.13) respectively, put them in the same volumetric flask, and dilute them with methanol to prepare a mixed standard working solution with the required concentration. 4.15 Solid phase extraction column: filled with lipophilic divinylbenzene and hydrophilic N-vinylpyrrolidone copolymer, 60 mg, 3 mL, which is activated with 2 mL of methanol and 4 mL of water in turn before use. 4.16 Organic filter membrane: 0.22 μm. 5 Apparatus 5.1 Liquid chromatography-mass spectrometer, equipped with electrospray ion source (ESI). 5.2 Analytical balance, with a sensitivity of 0.0001 g. 5.3 Analytical balance, with a sensitivity of 0.01 g. 5.4 Ultrasonic cleaner, with temperature controllable at (70±2)°C. 5.5 Rotary evaporator. 5.6 Solid phase extraction unit. 5.7 Nitrogen blowing instrument. 6 Determination procedures 6.1 Extraction and purification of sample Take representative samples, cut them into pieces about 5 mm×5 mm, and mix them evenly. Weigh 1 g of the cut sample (to the nearest of 0.01 g), put it in a 50 mL centrifuge tube, add 30 mL of methanol, and perform ultrasonic extraction at (70±2)°C for (60±5) min. Concentrate the extract to be nearly dry below 40°C with rotary evaporator, accurately add 2 mL of methanol to dissolve the residue, and filter it through a 0.22 μm filter membrane (4.16) for determination by LC-MS method. When impurities in samples (e.g., silk) interfere with detection, the following purification method is adopted. Dissolve the residue in the concentration bottle with 10 mL of methanol-water solution (4.7), and transfer it totally to the solid phase extraction column (4.15), and control the flow rate at 1 mL/min to 2 mL/min. Discard the effluent, dry it under reduced pressure for 10 min, elute with 5 mL of methanol-dichloromethane solution (4.8), and collect the eluate. Dry the eluate with nitrogen below 40°C, accurately add 2 mL of methanol to dissolve the residue, and filter it through a 0.22 μm filter membrane (4.16) for determination by LC-MS method.

Foreword i 1 Scope 2 Normative references 3 Principle 4 Reagents or materials 5 Apparatus 6 Determination procedures 7 Calculation and expression of results 8 Lower determination limit, recovery rate and precision of the methods 9 Test report Annex A (Informative) Determination of AP and APnEO by RP-HPLC method Annex B (Informative) Determination of AP and APnEO by NP-HPLC method Annex C (Informative) Determination of AP and APnEO by HILIC method Annex D (Informative) Selective ion monitoring chromatograms of AP and APEO determined by LC-MS method Annex E (Informative) Mass spectrometry reference conditions

纺织品 表面活性剂的测定 烷基酚和烷基酚聚氧乙烯醚 警示——使用本标准的人员应有正规实验室工作的实践经验。本标准并未指出所有可能的安全问题。使用者有责任采取适当的安全和健康措施，并保证符合国家有关法规规定的条件。 1 范围 本标准规定了纺织品中烷基酚（AP）和烷基酚聚氧乙烯醚（APnEO，n＝2～16）的液相色谱-质谱检测方法。 本标准适用于各类纺织产品。 注1：AP的分子结构通式为：R—C6H4—OH。本标准中AP足指常见的辛基酚[OP，C8H17—C6H4—OH]和壬基酚[NP，C9H19—C6H4—OH]。APnEO的分子结构通式为：R—C6H4—（OC2H4）nOH。夺标准中APnEO是指常用的辛基酚聚氧乙烯醚[OPnEO，C8H17—C6H4—（OC2H4）nOH]和壬基酚聚氧乙烯醚[NPnEO，C9H19—C6H4—（OC2H4）nOH]。 注2：烷基酚和烷基酚聚氧乙烯醚的反相高效液相色谱测定方法、正相高效液相色谱测定方法和亲水作用色谱（HILIC）测定办法分别参见附录A、附录B和附录C。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB／T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 3 原理 用甲醇超声提取试样中的AP和APnEO，提取液经浓缩和净化后，用液相色谱-质谱仪测定，外标法定量。 4 试剂或材料 4.1 除另有规定外，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB／T 6682规定的一级水。 4.2 甲醇（HPLC级）。 4.3 乙腈（HPLC级）。 4.4 正已烷（HPLC级）。 4.5 异丙醇（HPLC级）。 4.6 二氯甲烷（HPLC级）。 4.7 甲醇水溶液（3＋2）：准确量取300 mL甲醇（4.2）和200 mL水，混匀后备用。 4.8 甲醇-二氯甲烷溶液（1＋4）：准确量取100 mL甲醇（4.2）和400 mL二氯甲烷（4.6），混匀后备用。 4.9 辛基酚标准品（OP，CAS号140-66-9，纯度≥97％）。 4.10 壬基酚标准品（NP，CAS号25154-52-3，优级纯）。 4.11 辛基酚聚氧乙烯醚标准品（OPnEO，CAS号9002-93-1，平均聚合度n＝9，优级纯）。 4.12 壬基酚聚氧乙烯醚标准品（NPnEO，CAS号9016-45-9，平均聚合度n＝9，纯度≥99％）。 4.13 标准储备液：分别准确称取适量OP（4.9）、NP（4.10）、OPnEP（4.11）和NPnEO（4.12），用甲醇配制成浓度为10 mg／mL的单组分标准储备液。 4.14 标准工作溶液：分别移取OP、NP、OPnEO和NPnEO标准储备液（4.13）适量体积，置于同一容量瓶中，用甲醇稀释，配制成所需浓度的混合标准工作溶液。 4.15 固相萃取柱：填料为亲脂性二乙烯苯和亲水性N-乙烯基吡咯烷酮共聚物，60 mg，3 mL。使用前依次用2 mL甲醇、4 mL水活化。 4.16 有机系滤膜：0.22μm。 5 仪器和设备 5.1 液相色谱-质谱仪，配有电喷雾离子源（ESI）。 5.2 分析天平：感量0.0001 g。 5.3 分析天平：感量0.01 g。 5.4 超声波清洗器：可控温至（70±2）℃。 5.5 旋转蒸发仪。 5.6 固相萃取装置。 5.7 氮吹仪。 6 测定步骤 6.1 试样的提取和净化 取代表性试样，剪成约5 mm×5 mm的碎片，混匀。称取1 g剪碎的试样（精确至0.01 g），置于50 mL离心管中，加入30 mL 甲醇，在（70±2）℃下超声提取（60±5）min。用旋转蒸发仪在40℃以下将提取液浓缩至近干，准确加入2 mL甲醇溶解残渣，过0.22μm滤膜（4.16）后，供液相色谱-质谱测定。 当试样（如蚕丝类）中杂质干扰检测时，采用以下的净化方法。用10 mL甲醇-水溶液（4.7）溶解上述浓缩瓶中的残渣，全部转移至固相萃取柱（4.15）中，控制流速为1 mL／min～2 mL／min。弃去流出液，减压抽干10 min，用5 mL甲醇-二氯甲烷溶液（4.8）洗脱，收集洗脱液。将洗脱液在40℃以下用氮气吹干，准确加入2 mL甲醇溶解残渣，过0.22μm滤膜（4.16）后，供液相色谱-质谱测定。 6.2 测定 6.2.1 液相色谱-质谱法（LC-MS）参考色谱和质谱条件 由于测试结果取决于所使用的仪器，因此不可能给出色谱分析的普遍参数。采用下列参数已被证明对测试是合适的： a） 参考色谱条件： 1） 色谱柱：C18柱，3.5μm，2.1 mm×150 mm，或相当者； 2） 流动相：AP分析流动相为甲醇-水-乙腈（19＋75＋6），等度洗脱；APnEO梯度洗脱条件参见表1； 3） 流速：0.3 mL／min； 4） 进样量：10μL； 5） 柱温：35℃。 表1 APnEO分析LC-MS梯度洗脱条件 时间／min 甲醇／％ 水／％ 乙腈／％ 0.00 19 75 6 12.00 10 84 6 12.50 19 75 6 17.50 19 75 6 b） 参考质谱条件： 1） 离子源：电喷雾离子源； 2） 扫描方式：选择离子扫描； 3） AP采用负离子扫描模式，质量扫描范围：m／z 200～225，选择监测离子m／z 205（OP），m／z 219（NP）；APnEO采用正离子扫描模式，质量扫描范围：m／z 150～1000，选择监测离子m／z 361.5＋△44（OPEO，nEO＝3～16），m／z 361.5＋△44（NPEO，nEO＝3～16）； 4） 毛细管电压：4 500 V； 5） 干燥气为高纯氮气，干燥气温度：350℃，干燥气流速：10 L／min。 6.2.2 液相色谱-串联质谱法（LC-MS／MS）参考色谱和质谱条件 由于测试结果取决于所使用的仪器。因此不可能给出色谱分析的普遍参数。采用下列参数已被证明对测试是合适的： a） 参考色谱条件： 1） 色谱柱：C18柱，5.0μm，4.6 mm×150 mm，或相当者； 2） 流动相：AP梯度洗脱条件参见表2，APnEO梯度洗脱条件参见表3； 3） 流速：0.6 mL／min； 4） 进样量：5μL； 5） 柱温：30℃。 b） 参考质谱条件： 1） 离子源：电喷雾离子源； 2） 扫描极性：AP采用负离子扫描，APnEO采用正离子扫描； 3） 扫描方式：多反应监测（MRM）； 4） 雾化气、碰撞气均为高纯氮气； 5） 监测离子对及电压等参数参见附录D。 表2 AP分析LC-MS／MS梯度洗脱条件 时间／min 水／％ 甲醇／％ 0.00 80 20 2.00 20 80 4.00 20 80 4.10 80 20 8.00 80 20 表3 APnEO分析LC-MS／MS梯度洗脱条件 时间／min 0.005mol／L乙酸铵／％ 甲醇／％ 0.00 80 20 2.00 20 80 4.00 20 80 4.10 80 20 8.00 80 20 6.2.3 定性测定 6.2.3.1 LC-MS定性 标准工作溶液和样液等体积穿插进样，首先对待测样进行全扫描分析，然后与标准品的保留时间和质谱图对照，对待测组分进行定性。 6.2.3.2 LC-MS／MS定性 按照LC-MS／MS条件测定样品和标准工作溶液，样品的质量色谱峰保留时间与标准品中对应的保留时间一致；且样品中各组分定性离子的相对丰度与接近浓度的标准工作溶液中相应的定性离子的相对丰度进行比较，偏差不超过表4规定的范围，则可判定样品中存在对应的被测物。 表4 定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差 相对离子丰度 ＞50％ ＞20％～50％ ＞10％～20％ ≤10％ 允许的相对偏差 ±20％ ±25％ ±30％ ±50％ 6.2.4 定量测定 在仪器最佳工作条件下，对标准工作溶液进行测定，以待测物的浓度为横坐标，以待测物的峰面积为纵坐标绘制标准工作曲线，用标准工作曲线按外标法对待测样品进行定量，样品溶液中待测物的响应值均应在仪器测定的线性范围内。在上述分析条件下，LC-MS法测定AP和APnEO的选择离子监测色谱图参见附录D中图D.1和图D.2；LC-MS-MS法测定AP和APnEO的保留时间参见附录E中表E.1，AP和APnEO的多反应监测（MRM）色谱图参见附录E中图E.1～图E.7。 6.3 空白试验 除不加试样外.均按上述步骤进行。 7 结果计算和表述 7.1 LC-MS法计算公式 按式（1）计算试样中烷基苯酚类和烷基苯酚聚氧乙烯醚类含量： （1） 式中： X——试样中待测物的含量，单位为毫克每千克（mg／kg）； c——从标准工作曲线得到的样液中待测物的浓度，单位为毫克每升（mg／L）； c0——从标准工作曲线得到的空白试验溶液中待测物的浓度，单位为毫克每升（mg／L）； V——样液最终定容体积，单位为毫升（mL）； m——最终样液所代表试样的质量，单位为克（g）。 结果保留至小数点后两位。 7.2 LC-MS／MS法计算公式 7.2.1 标准工作溶液中聚合度为n的APnEO浓度计算 按式（2）计算APnEO中每种组分的质量分数： （3） 式中： Rn——聚合度为n的APnEO质量分数； An——聚合度为n的APnEO峰面积； ∑Ai——APnEO峰面积之和（聚合度从2～16）。 按式（3）计算标准工作溶液中聚合度为n的APnEO浓度： Cn＝Rn×Cs （3） 式中： Cn——标准工作溶液中聚合度为n的APnEO浓度，单位为毫克每升（mg／L）； Rn——聚合度为n的APnEO质量分数； Cs——APnEO标准工作溶液的浓度，单位为毫克每升（mg／L）。 7.2.2 AP和APnEO含量计算 按式（4）计算试样中AP的含量： （4） 式中： X——试样中OP或NP的含量，单位为毫克每千克（mg／kg）； c——从标准工作曲线得到的样液中OP或NP的浓度，单位为毫克每升（mg／L）； c0——从标准工作曲线得到的空白试验溶液中OP或NP的浓度，单位为毫克每升（mg／L）； V——样液最终定容体积，单位为毫升（mL）； m——最终样液所代表试样的质量，单位为克（g）。 按式（5）计算试样中APnEO的含量： （5） 式中： X——试样中OPnEO或NPnEO的含量，单位为毫克每千克（mg／kg）； ci——从标准工作曲线得到的样液中聚合度为i的OPnEO或NPnEO的浓度，单位为毫克每升（mg／L）； c0——从标准工作曲线得到的空白试验溶液中聚合度为i的OPnEO或NPnEO的浓度，单位为毫克每升（mg／L）； V——样液最终定容体积，单位为毫升（mL）； m——最终样液所代表试样的质量，单位为克（g）。 结果保留至小数点后两位。 8 方法的测定低限、回收率和精密度 8.1 测定低限 LC-MS法对试样中辛基苯酚、壬基苯酚、辛基苯酚聚氧乙烯醚和壬基苯酚聚氧乙烯醚的测定低限分别为0.25 mg／kg、0.5 mg／kg、0.5 mg,／kg、0.5 mg／kg；LC-MS／MS法对试样中AP的测定低限为0.1 mg／kg，APnEO的测定低限为1.0 mg／kg。 8.2 回收率 方法回收率范围为80％～110％。 8.3 精密度 在同一实验室，由同一操作者使用相同的设备、按相同的测试方法，在短时间内对同一被测对象进行独立的测试，两次独立测试结果的绝对差值不大于这两个测定值的算术平均值的10％。以大于这两个测定值的算术平均值的10％的情况不超过5％为前提。 9 试验报告 试验报告至少应给出下述内容： a） 样品来源及描述； b） 采用的测试方法； c） 测试结果； d） 任何偏离本标准的细节； e） 试验日期。 附录A （资料性附录） 烷基酚和烷基酚聚氧乙烯醚的反相高效液相色谱测定方法 A.1 概述 本附录给出了纺织品中烷基酚（AP）和烷基酚聚氧乙烯醚（APnEO，n＝2～16）的反相高效液相色谱测定方法。 A.2 原理 用甲醇超声提取试样中的AP和APnEO，提取液经浓缩和净化后，用配有荧光检测器的高效液相色谱仪测定，外标法定量。 A.3 试剂或材料 同第4章。 A.4 仪器和设备 A.4.1 高效液相色谱仪，配有荧光检测器。 A.4.2 分析天平：感量0.0001 g。 A.4.3 分析天平：感量0.01 g。 A.4.4 超声波清洗器：可控温至（70±2）℃。 A.4.5 旋转蒸发仪。 A.4.6 固相萃取装置。 A.4.7 氮吹仪。 A.5 测定步骤 A.5.1 试样的提取和净化 取代表性试样，剪成约5 mm×5 mm的碎片，混匀。称取1 g剪碎的试样（精确至0.01 g），置于50 mL离心管中加入30 mL甲醇，在（70±2）℃下超声提取（60±5）min。用旋转蒸发仪在40℃以下将提取液浓缩至近干，准确加入2 mL甲醇溶解残渣，过0.22μm滤膜（4.16）后，供反相高效液相色谱测定。 当试样（如蚕丝类）中杂质干扰检测时，采用以下的净化方法。用10 mL甲醇-水溶液（4.7）溶解上述浓缩瓶中的残渣，全部转移至固相萃取柱（4.15）中，控制流速为1 mL／min～2 mL／min。弃去流出液，减压抽干10 min，用5 mL甲醇-二氯甲烷溶液（4.8）洗脱，收集洗脱液。将洗脱液在40℃以下用氮气吹干，准确加入2 mL甲醇溶解残渣，过0.22μm滤膜（4.16）后，供反相高效液相色谱测定。 A.5.2 测定 A.5.2.1 参考色谱条件 由于测试结果取决于所使用的仪器，因此不可能给出色谱分析的普遍参数。采用下列参数已被证明对测试足合适的： a） 色谱柱：C18柱.5.0μm，4.6 mm×250 mm，或相当者； b） 色谱柱温度：35℃； c） 流动相：甲醇-水-乙腈（81＋13＋6，体积比）； d） 检测波长：激发波长230 nm，发射波长296 nm； c） 流速：1.0 mL／min； f） 进样量：10μL。 A.5.2.2 色谱测定 根据样液中AP和APnEO含量，选择浓度相近的标准工作溶液（4.14）。对标准工作溶液和样液等体积穿插进样测定。标准工作溶液和样液中AP和APnEO的响应值均应在仪器检测的线性范围内。在上述色谱条件下，AP和APnEO的保留时间参见表A.1，液相色谱图参见图A.1。当样液的色谱峰保留时间与标准工作溶液一致时，可用LC-MS／MS法进一步分析确证。 表A.1 烷基酚和烷基酚聚氧乙烯醚标准品的反相HPLC参考保留时间 序号 中文名称 英文简称 参考保留时间／min 1 辛基酚 OP 7.88 2 辛基酚聚氧乙烯醚 OPnEO 9.02 3 壬基酚 NP 10.19 4 壬基酚聚氧乙烯醚 NPnEO 11.81 响应值／mAu 时间／min 图A.1 烷基酚和烷基酚聚氧乙烯醚标准品的反相HPLC色谱图 A.5.3 空白试验 除不加试样外，均按上述步骤进行。 A.6 结果计算和表述 按式（A.1）计算试样中待测物的含量： （A.1） 式中： X——试样中待测物的含量，单位为毫克每千克（mg／kg）； c——从标准工作曲线得到的样液中待测物的浓度，单位为毫克每升（mg／L）； c0——从标准工作曲线得到的空白试验溶液中待测物的浓度，单位为毫克每升（mg／L）； V——样液最终定容体积，单位为毫升（mL）； m——最终样液所代表试样的质量，单位为克（g）。 结果保留至小数点后两位。 A.7 方法的测定低限、回收率和精密度 A.7.1 测定低限 本方法对试样中AP和APnEO的测定低限为1.0 mg／kg。 A.7.2 回收率 方法回收率范围为80％～110％。 A.7.3 精密度 在同一实验室，由同一操作者使用相同的设备、按相同的测试方法，在短时间内对同一被测对象进行独立的测试，两次独立测试结果的绝对差值不大于这两个测定值的算术平均值的10％。以大于这两个测定值的算术平均值的10％的情况不超过5％为前提。 A.8 试验报告 同第9章。 附录B （资料性附录） 烷基酚和烷基酚聚氧乙烯醚的正相高效液相色谱测定方法 B.1 概述 本附录给出了纺织品中烷基酚（AP）和烷基酚聚氧乙烯醚（APnEO，n＝2～16）的正相高效液相色谱测定方法。 B.2 原理 用甲醇超声提取试样中的AP和APnEO，提取液经浓缩和净化后，用配有荧光检测器的高效液相色谱仪测定，外标法定量。 B.3 试剂或材料 B.3.1 除另有规定外，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB／T 6682规定的一级水。 B.3.2 甲醇（HPLC级）。 B.3.3 乙腈（HPLC级）。 B.3.4 正已烷（HPLC级）。 B.3.5 异丙醇（HPLC级）。 B.3.6 二氯甲烷（HPLC级）。 B.3.7 甲醇-水溶液（3＋2）：准确量取300 mL甲醇（B.3.2）和200 mL水，混匀后备用。 B.3.8 甲醇-二氯甲烷溶液（1＋4）：准确量取100 mL甲醇（4.2）和400 mL二氯甲烷（B.3.6），混匀后备用。 B.3.9 辛基酚标准品（OP，CAS号140-66-9，纯度≥97％）。 B.3.10 壬基酚标准品（NP，CAS号25154-52-3，优级纯）。 B.3.11 辛基酚聚氧乙烯醚标准品（OPnEO，CAS号9002-93-1，平均聚合度n＝9，优级纯）。 B.3.12 壬基酚聚氧乙烯醚标准品（NPnEO，CAS号9016-45-9，平均聚合度，n＝9，纯度≥99％）。 B.3.13 标准储备液：分别准确称取适量OP（B.3.9）、NP（B.3.10）、OPnEO（B.3.11）和NPnEO（B.3.12），用异丙醇配制成浓度为10 mg／mL的单组分标准储备液。 B.3.14 标准工作溶液：分别移取OP、NP、OPnEO和NPnEO标准储备液（B.3.13）适量体积，置于同一容量瓶中，用异丙醇稀释，配制成所需浓度的混合标准工作溶液。 B.3.15 固相萃取柱：填料为亲脂性二乙烯苯和亲水性N-乙烯基吡咯烷酮共聚物，60 mg，3 mL。使用前依次用2 mL甲醇、4 mL水活化。 B.3.16 有机系滤膜：0.22μm。 B.4 仪器和设备 B.4.1 高效液相色谱仪，配有荧光检测器。 B.4.2 分析天平：感量0.000 1 g。 B.4.3 分析天平：感量0.01 g。 B.4.4 超声波清洗器：可控温至（70±2）℃。 B.4.5 旋转蒸发仪。 B.4.6 固相萃取装置。 B.4.7 氮吹仪。 B.5 测定步骤 B.5.1 试样的提取和净化 取代表性试样，剪成约5 mm × 5 mm的碎片，混匀。称取1 g剪碎的试样（精确至0.01 g），置于50 mL离心管中。加入30 mL甲醇，在（70±2）℃下超声提取（60±5）min。用旋转蒸发仪在40℃以下将提取液浓缩至近干，准确加入2 mL异丙醇溶解残渣，过0.22μm滤膜（B.3.16）后，供正相高效液相色谱测定。 当试样（如蚕丝类）中杂质干扰检测时，采用以下的净化方法。用10 mL甲醇-水溶液（B.3.7）溶解上述浓缩瓶中的残渣，全部转移至固相萃取柱（B.3.15）中，控制流速为1 mL／min～2 mL／min。弃去流出液，减压抽干10 min，用5 mL甲醇-二氯甲烷溶液（B.3.8）洗脱，收集洗脱液。将洗脱液在40℃以下用氮气吹干，准确加入2 mL异丙醇溶解残渣，过0.22μm滤膜（B.3.16）后，供正相高效液相色谱测定。 B.5.2 测定 B.5.2.1 参考色谱条件 由于测试结果取决下所使用的仪器，因此不可能给出色谱分析的普遍参数。采用下列参数已被证明对测试是合适的： a） 色谱柱：氨基柱，5.0μm，4.6 mm×250 mm，或相当者； b） 色谱柱温度：30℃； c） 流动相：梯度洗脱条件见表B.1； d） 检测波长：激发波长230 nm，发射波长296 nm； e） 流速：1.0 mL／min； f） 进样体积：20μL。 表B.1 正相HPLC梯度洗脱条件 时间／min 正已烷-异丙醇（90＋10，体积比）／％ 异丙醇-水（90＋10，体积比）／％ 0 100 0 20 70 30 30 70 30 40 40 60 45 40 60 50 100 0 55 100 0 B.5.2.2 色谱测定 根据样液中AP和APnEO含量，选择浓度相近的标准工作溶液（B.3.14）。对标准工作溶液和样液等体积穿插进样测定。标准工作溶液和样液中AP和APnEO的响应值均应在仪器检测的线性范围内。在上述色谱条件下，AP和APnEO的保留时间参见表B.2，液相色谱图参见图B.1和图B.2。当样液的色谱峰保留时间与标准工作溶液一致时，可用LC-MS／MS法进一步分析确证。 表B.2 烷基酚和烷基酚聚氯乙烯醚标准品的正相HPLC的参考保留时间 OP和OPnEO NP和NPnEO 出峰序号 待测物 参考保留时间／min 出峰序号 待测物 参考保留时间／min 1 OP 5.193 1 NP 5.087 2 OP2EO 7.711 2 NP2EO 7.628 3 OP3EO 10.610 3 NP3EO 10.478 4 OP4EO 15.261 4 NP4EO 14.831 5 OP5EO 17.595 5 NP5EO 17.577 6 OP6EO 20.525 6 NP6EO 20.440 7 OP7EO 22.616 7 NP7EO 22.393 8 OP8EO 24.473 8 NP8EO 24.186 9 OP9EO 26.393 9 NP9EO 26.039 10 OP10EO 28.358 10 NP10EO 27.961 11 OP11EO 30.362 11 NP11EO 29.869 12 OP12EO 32.758 12 NP12EO 31.847 13 OP13EO 37.219 13 NP13EO 36.490 14 OP14EO 40.265 14 NP14EO 39.816 15 OP15EO 43.341 15 NP15EO 42.938 16 OP16EO 46.480 16 NP16EO 46.247 响应值／mAu 时间／min 图B.1 辛基酚和辛基酚聚氧乙烯醚标准品的正相HPLC色谱图 响应值／mAu 时间／min 图B.2 壬基酚和壬基酚聚氩乙烯醚标准品的正相HPLC色谱图 B.5.3 空白试验 除不加试样外，均按上述步骤进行。 B.6 结果计算和表述 按7.2在式（3）计算试样中OP或NP的含量。按式（B.1）、式（B.2）和式（B.3）计算试样中OPnEO和NPnEO的含量： X＝∑Xn （B.1） （B.2） （B.3） 式中 X——试样中各聚合度，n（n＝2～16）的OPnEO或NPnEO含量总和，单位为毫克每千克（mg／kg）； Xn——试样中聚合度为n的OPnEO或NPnEO的含量，单位为毫克每千克（mg／kg）； An——样液中聚合度为n的OPnEO或NPnEO的峰面积； cns——标准工作溶液中聚合度为n的OPnEO或NPnEO的浓度，单位为毫克每升（mg／L）； V——样液最终定容体积，单位为毫升（mL）； Ans——标准工作溶液中聚合度为n的OPnEO或NPnEO的峰面积； m——样液所代表试样的质量，单位为克（g）； Mns——聚合度为n的OPnEO或NPnEO的相对分子质量； cs——标准工作溶液中OPnEO或NPnEO的浓度，单位为毫克每升（mg／L）。 结果保留至小数点后两位。 B.7 方法的测定低限、回收率和精密度 B.7.1 测定低限 本方法对试样中AP的测定低限为1.0 mg／kg，APnEO的测定低限为10 mg／kg。 B.7.2 回收率 方法回收率范围为80％～110％。 B.7.3 精密度 在同一实验室，由同一操作者使用相同的设备、按相同的测试方法，在短时间内对同一被测对象进行独立的测试，两次独立测试结果的绝对差值不大于这两个测定值的算术平均值的10％。以大于这两个测定值的算术平均值的10％的情况不超过5％为前提。 B.8 试验报告 同第9章。 附录C （资料性附录） 烷基酚和烷基酚聚氧乙烯醚的亲水作用色谱（HILIC）测定方法 C.1 概述 本附录给出了纺织品中烷基酚（AP）和烷基酚聚氧乙烯醚（APnEO，n＝2～16）的亲水作用色谱（HILIC）测定方法。 C.2 原理 用甲醇超声提取试样中的AP和APnEO，提取液经浓缩和净化后，用配有荧光检测器的高效液相色谱仪测定，外标法定量。 C.3 试剂或材料 C.3.1 除另有规定外，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB／T 6682规定的一级水。 C.3.2 甲醇（HPLC级）。 C.3.3 乙腈（HPLC级）。 C.3.4 正已烷（HPLC级）。 C.3.5 异丙醇（HPLC级）。 C.3.6 二氯甲烷（HPLC级）。 C.3.7 甲醇-水溶液（3＋2）：准确量取300 mL甲醇（C.3.2）和200 mL水，混匀后备用。 C.3.8 甲醇-二氯甲烷溶液（1＋4）：准确量取100 mL 甲醇（C.3.2）和400 mL二氯甲烷（C.3.6），混匀后备用。 C.3.9 辛基酚标准品（OP，CAS号140-66-9，纯度≥97％）。 C.3.10 壬基酚标准品（NP，CAS号25154-52-3，优级纯）。 C.3.11 辛基酚聚氧乙烯醚标准品（OPnEO，CAS号9002-93-1，平均聚合度，n＝9，优级纯）。 C.3.12 壬基酚聚氧乙烯醚标准品（NPnEO，CAS号9016-15-9，平均聚合度，n＝9，纯度≥99％）。 C.3.13 标准储备液：分别准确称取适量OP（C.3.9）、NP（C.3.10）、OPnEO（C.3.11）和NPnEO（C.3.12）。用乙腈配制成浓度为10 mg／mL的单组分标准储备液。 C.3.14 标准工作溶液：分别移取OP、NP、OPnEO和NPnEO标准储备液（C.3.13）适量体积，置于同一容量瓶中，用乙腈稀释，配制成所需浓度的混合标准工作溶液。 C.3.15 固相萃取柱：填料为亲脂性二乙烯苯和亲水性N-乙烯基吡咯烷酮共聚物，60 mg，3 mL。使用前依次用2 mL甲醇、4 mL水活化。 C.3.16 有机系滤膜：0.22μm。 C.4 仪器和设备 C.4.1 高效液相色谱仪，配有荧光检测器。 C.4.2 分析天平：感量0.0001 g。 C.4.3 分析天平：感量0.01 g。 C.4.4 超声波清洗器：可控温至（70±2）℃。 C.4.5 旋转蒸发仪。 C.4.6 固相萃取装置。 c.4.7 氮吹仪。 C.5 测定步骤 C.5.1 试样的提取和净化 取代表性试样，剪成约5 mm×5 mm的碎片，混匀。称取1 g剪碎的试样（精确至0.01 g），置于50 mL离心管中，加入30 mL 甲醇。在（70±2）℃下超声提取（60±5）min。用旋转蒸发仪在40℃以下将提取液浓缩至近干，准确加入2 mL乙腈溶解残渣，过0.22μm滤膜（C.3.16）后，供亲水作用色谱测定。 当试样（如蚕丝类）中杂质干扰检测时。采用以下的净化方法。用10 mL 甲醇-水溶液（C.3.7）溶解上述浓缩瓶中的残渣，全部转移至固相萃取柱（C.3.15）中，控制流速为1 mL／min～2 mL／min。弃去流出液，减压抽干10 min。用5 mL甲醇-二氯甲烷溶液（C.3.8）洗脱，收集洗脱液。将洗脱液在40℃以下用氮气吹干，准确加入2 mL乙腈溶解残渣，过0.22μm滤膜（C.3.16）后，供亲水作用色谱测定。