标准编号:	GB/T 18872-2017
中文名称:	饲料中维生素K3的测定 高效液相色谱法
英文名称:	Determination of vitamin k3in feeds-High performance liquid chromatography
中标分类:	B46    畜禽饲料与添加剂
行业分类:	GB    国家标准
ICS分类:	65.120 65.120    饲料 65.120
发布机构:	中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 中国国家标准化管理委员会
发布日期:	2017-11-01
实施日期:	2018-5-1
标准状态:	valid
替代旧标准:	GB/T 18872-2002 饲料中维生素K3的测定 高效液相色谱法
翻译语言:	英文
文件格式:	PDF
中文字符数:	11000 字
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Determination of vitamin K3 in feeds - High performance liquid chromatography 1 Scope This standard specifies a high performance liquid chromatography for the determination of vitamin K3 (menadione sodium bisulfite, menadione nicotinamide bisulfite and menadione dimethylpyrimidinol bisulfite, calculated in menadione) in feeds. This standard is applicable to the determination of vitamin K3 in formula feed, concentrate, additive premixed feed and concentrate supplement. The limit of quantification of the method is 0.4mg/kg. 2 Normative references The following referenced documents are indispensable for the application of this document. For dated references, only the edition cited applies. For undated references, the latest edition of the referenced document (including any amendments) applies. GB/T 603 Chemical reagent - Preparations of reagent solutions for use in test methods GB/T 6682 Water for analytical laboratory use - Specification and test methods GB/T 14699.1 Feeding stuffs - Sampling GB/T 20195 Animal feeding stuffs - Preparation of test samples 3 Principle The test samples are extracted by trichloromethane and sodium carbonate solution and then transformed into free menadione, separated by reversed-phase C18 column, detected by UV detector, and quantified by external standard method. 4 Reagents and materials Unless otherwise specified, all reagents in this standard are analytically-pure reagents, the test water shall meet the requirements Grade III water in GB/T 6682, the chromatography water shall meet the requirements Grade I water in GB/T 6682, and the solution is prepared in accordance with GB/T 603. 4.1 Trichloromethane. 4.2 Methanol: chromatographically pure. 4.3 Anhydrous sodium carbonate. 4.4 Sodium carbonate solution: c=1mol/L. Weigh 10.6g of anhydrous sodium carbonate, add 100mL of water to dissolve and shake well. 4.5 Anhydrous sodium sulfate. 4.6 Diatomite. 4.7 Mixture of diatomite and anhydrous sodium sulfate: weigh 3g of diatomite and 20g of anhydrous sodium sulfate and mix them well. 4.8 Menadione standard: with content≥96%.

Foreword i 1 Scope 2 Normative references 3 Principle 4 Reagents and materials 5 Apparatuses 6 Sampling and sample preparation 7 Analytical procedures 8 Result calculation 9 Repeatability Annex A (Informative) Examples of labeled amount and weighing amount of feed samples and dilution factor of menadione extract Annex B (Informative) Chromatogram of menadione standard solution

饲料中维生素K3的测定 高效液相色谱法 1 范围 本标准规定了饲料中维生素K3（亚硫酸氢钠甲萘醌、亚硫酸氢烟酰胺甲萘醌、二甲基嘧啶醇亚硫酸甲萘醌，以甲萘醌计）含量测定的高效液相色谱方法。 本标准适用于配合饲料、浓缩饲料、添加剂预混合饲料和精料补充料中维生素K3的测定。方法的定量限为0.4 mg／kg。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB／T 603化学试剂试验方法中所用制剂及制品的制备 GB／T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 GB／T 14699.1 饲料 采样 GB／T 20195 动物饲料 试样的制备 3 原理 试样经三氯甲烷和碳酸钠溶液提取并转化成游离甲萘醌，经反相C18柱分离，紫外检测器检测，外标法定量。 4 试剂和材料 除另有说明外，本标准所有试剂均为分析纯试剂，试验用水符合GB／T 6682中三级用水规定，色谱用水符合GB／T 6682中一级用水规定，溶液按照GB／T 603配制。 4.1 三氯甲烷。 4.2 甲醇：色谱纯。 4.3 无水碳酸钠。 4.4 碳酸钠溶液：c＝1 mol／L，称取无水碳酸钠（4.3）10.6 g，加100 mL水溶解，摇匀。 4.5 无水硫酸钠。 4.6 硅藻土。 4.7 硅藻土和无水硫酸钠混合物：称取3g硅藻土与20g无水硫酸钠混匀。 4.8 甲萘醌标准品：含量≥96％。 4.9 甲萘醌标准贮备液：称取甲萘醌标准品（4.8）约50 mg（精确至0.000 01 g）于100 mL棕色容量瓶中，用甲醇溶解，稀释至刻度，混匀。该贮备液浓度约为500μg／mL，－18℃保存，有效期一年。 4.10 甲萘醌标准工作液：准确吸取1.00 mL甲萘醌标准贮备液（4.9）于100 mL棕色容量瓶中，用甲醇溶解，稀释至刻度，混匀。该工作液浓度约为5μg／mL，－18℃保存，有效期3个月。 5 仪器和设备 5.1 实验室常用仪器设备。 5.2 天平，感量0.001 g。 5.3 天平，感量0.0001g。 5.4 天平，感量0.000 01g。 5.5 旋转振荡器，200r／min。 5.6 离心机：不低于5 000 r／min（相对离心力为2 988 g ）。 5.7 氮吹仪（或旋转蒸发仪）。 5.8 高效液相色谱仪，带紫外可调波长检测器（或二极管矩阵检测器）。 6 采样和试样制备 按照GB／T 14699.1抽取有代表性的饲料样品，用四分法缩减取样。 按照GB／T 20195制备试样，磨碎，全部通过0.25mm孔筛，混匀，装入密闭容器中，避光低温保存备用。 7 分析步骤 警示——因维生素K3对空气和紫外光具敏感性，而且所用提取剂三氯甲烷溶液有一定毒性，所以全部操作均应避光并在通风橱内进行。 7.1 试样溶液的制备 称取维生素预混合饲料0.25 g～0.5 g（精确至0.000 1 g）或复合预混合饲料1 g或浓缩饲料5 g（精确至0.001 g）、 配合饲料、精料补充料5 g～10 g（精确至0.001 g），置入100 mL具塞锥形瓶中，准确加入50mL三氯甲烷（4.1）放在旋转振荡器（5.5）旋转振荡2min。加5mL碳酸钠溶液（4.4）旋转振荡3min。再加5g硅藻土和无水硫酸钠混合物（4.7），于旋转振荡器上振荡30min，然后用中速滤纸过滤（或移入离心管，5 000 r／min离心10 min）。 依据样品预期量、称样量和提取液量确定分取量（参见表A.1），准确吸取适量三氯甲烷提取液（V2），用氮气吹干（或40℃旋转减压蒸干）。用甲醇（4.2）溶解，定容（V3），使试样溶液浓度为每毫升含甲茶醌0.1μg～5μg。通过0.45μm有机滤膜过滤，用于高效液相色谱仪分析。 7.2 测定 7.2.1 参考色谱条件 色谱柱：C18型柱，长150 mm，内径4.6 mm，粒度5μm，或性能类似的分析柱； 流动相：甲醇＋水（75＋25）； 流速：1.0 mL／min； 柱温：室温； 进样量：5μL～20μL； 检测波长：251 nm。 7.2.2 定量测定 依次注入相应的甲萘醌标准工作液（4.10）和试样溶液（7.1），得到色谱峰面积响应值，用外标法定量测定，甲萘醌标准溶液色谱图参见图B.1。 8 结果计算 试样中甲萘醌的含量X，以甲萘醌在样品中的质量分数表示，单位为毫克每千克（mg／kg），按式（1）计算： （1） 式中： P1——试样溶液峰面积值； V1——提取液的总体积，单位为毫升（mL）； V3——试样溶液定容体积，单位为毫升（mL）； ρ——甲萘醌标准工作液浓度，单位为微克每毫升（μg／mL）； P2——甲萘醌标准工作液峰面积值； m——试样质量，单位为克（g）； V2——从提取液（V1）中分取的溶液体积，单位为毫升（mL）。 注：饲料中维生素K3的添加剂有亚硫酸氢钠甲萘醌、亚硫酸氢烟酰胺甲萘醌和二甲基嘧啶醇亚硫酸甲萘醌，与甲萘醌之间的转换系数为：1mg的甲萘醌相当于1.9182mg的亚硫酸氢钠甲萘醌；1mg的甲萘醌相当于2.186mg的亚硫酸氢烟酰胺甲萘醌；1mg的甲萘醌相当于2.198mg的二甲基嘧啶醇亚硫酸甲萘醌。 测定结果用平行测定的算术平均值表示，计算结果保留3位有效数字。