GB 18281.1-2015 Sterilization of health care products - Biological indicators Part 2: Biological indicators for ethylene oxide sterilization processes
1 Scope
This part of GB 18281 provides specific requirements for test organisms, suspensions, inoculated carriers, biological indicators and test methods intended for use in assessing the performance of sterilizers and sterilization processes employing ethylene oxide gas as the sterilizing agent, either as pure ethylene oxide gas or mixtures of this gas with diluent gases, at sterilizing temperatures within the range of 29 ℃ to 65 ℃.
Note 1: Requirements for validation and control of ethylene oxide sterilization processes are provided by GB 18279.
Note 2: National or regional regulations could provide requirements for work place safety.
2 Normative references
The following referenced documents are indispensable for the application of this document. For dated references, only the edition cited applies. For undated references, the latest edition of the referenced document (including any amendments) applies.
ISO 11138-1:2006 Sterilization of health care products - Biological indicators - Part 1: General requirements
ISO 18472 Sterilization of health care products - Biological and chemical indicators - Test equipment
3 Term and definition
For the purposes of this document, the terms and definitions given in ISO 11138-1 apply.
4 General requirements
The requirements of ISO 11138-1 apply.
5 Test organism
5.1 The test organisms shall be spores of Bacillus atrophaeus, Bacillus subtilis or other
Foreword I
Introduction III
1 Scope
2 Normative references
3 Term and definition
4 General requirements
5 Test organism
6 Suspension
7 Carrier and primary packaging
8 Inoculated carriers and biological indicators
9 Population and resistance
Annex A (Normative) Method for determination of resistance to ethylene oxide sterilization
Bibliography
医疗保健产品灭菌 生物指示物
第1部分：通则
1 范围
1.1 适用
1.1.1 GB 18281的本部分规定了拟用于确认和监测灭菌周期的生物指示物(包括染菌载体、试验菌悬液)及其他组成部分在生产、标识、检测方法和性能方面的通用要求。
1.1.2 本部分的基本要求适用于GB 18281的其他各部分。对于用于特殊灭菌过程中的生物指示物的要求在GB 18281的其他部分都有所规定。本部分适用于没有特殊要求的生物指示物。
1.2 不适用
本部分不适用于依靠物理方式去除微生物的检测体系，例如过滤过程或利用清洗消毒器或流通蒸汽等物理和/或机械方法去除微生物的过程。然而，本部分应包含相应的微生物测试系统的内容。
2 规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。
ISO 8601 数据元和交换格式 信息交换 日期和时间表示法(Data elements and interchange formats—Information interchange—Representation of dates and times)
ISO 11135-1 医疗保健产品灭菌 环氧乙烷 第1部分：医疗器械灭菌过程的开发、确认和常规控制的要求(Sterilization of health care products—Ethylene oxide—Part 1： Requirements for development， validation and routine control of a sterilization process for medical devices)
ISO 11135-2 医疗保健产品灭菌 环氧乙烷 第2部分：ISO 11135-1应用指南(Sterilization of health care products—Ethylene oxide—Part 2： Guidance on the application of ISO 11135-1)
ISO 11137-1 医疗保健产品灭菌 辐射 第1部分：医疗器械灭菌过程的开发、确认和常规控制要求(Sterilization of health care products—Radiation—Part 1：Requirements for development， validation and routine control of a sterilization process for medical devices)
ISO 11137-2 医疗保健产品灭菌 辐射 第2部分：建立灭菌剂量(Sterilization of health care products—Radiation—Part 2 ： Establishing the sterilization dose)
ISO 11137-3 医疗保健产品灭菌 辐射 第3部分：剂量测量指南(Sterilization of health care products—Radiation—Part 3 ： Guidance on dosimetric aspects)
ISO 11607-1 最终灭菌医疗器械的包装 第1部分：材料、无菌屏障系统和包装系统要求(Packaging for terminally sterilized medical devices—Part 1： Requirements for materials， sterile barrier systems and packaging systems)
ISO 11607-2 最终灭菌医疗器械的包装 第2部分：成形、密封和装配过程的确认(Packaging for terminally sterilized medical devices—Part 2： Validation requirements for forming， sealing and assembly processes)
ISO 11737-1 医疗器材的灭菌 微生物学方法 第1部分：产品上微生物总数的估计(Sterilization of medical devices—Microbiological methods—Part 1： Determination of a population of microorganisms on products)
ISO 13485 医疗器械 质量管理体系 用于法规的要求(Medical devices—Quality management systems—Requirements for regulatory purposes)
ISO 15223 医疗器械 用于医疗器械标签、标记和提供信息的符号(Medical devices—Symbols to be used with medical device labels， labelling and information to be supplied)
ISO 17665-1 医疗保健产品灭菌 湿热 第1部分：医疗器械灭菌过程的开发、确认和常规控制要求(Sterilization of health care products—Moist heat—Part 1： Requirements for the development， validation and routine control of a sterilization process for medical devices)
ISO 18472 医疗保健产品灭菌 生物与化学指示物 测试设备(Sterilization of health care products—Biological and chemical indicators—Test equipment)
3 术语和定义
下列术语和定义适用于本文件。
3.1
生物指示物 biological indicator
对规定的灭菌过程有特定的抗力，含有活微生物的测试系统。
[ISO/TS 11139：2006，定义2.3]
3.2
载体 carrier
可涂覆试验微生物的支持材料。
3.3
菌落形成单位 colony forming unit
CFU
由单个或多个细胞生长构成的肉眼可见的活的微生物群落。
3.4
菌种保藏编号 culture collection number
由科学界公认的菌种保藏机构提供的试验微生物的唯一编号。
3.5
培养条件 culture conditions
促进微生物复苏、生长和(或)繁殖所采用的生长培养基和接种方式的组合。
[ISO/TS 11139：2006，定义2.10]
注：接种方式包括接种温度、接种时间和其他特定接种条件。
3.6
D值 D value
D10值 D10 value
在规定的条件下，灭活试验微生物总数的90％所需的时间或剂量。
[ISO/TS 11139：2006，定义2.11]
3.7
FBIO值FBIO value
反映了生物指示物的抗力，其根据D值与微生物的对数减少量的乘积计算得到。
3.8
灭活 inactivation
微生物生长和(或)繁殖能力的丧失。
[ISO/TS 11139：2006，定义2.21]
3.9
灭活曲线 inactivation curve
在设定的条件下，试验微生物的灭活与对灭菌介质暴露增强的关系曲线图。
3.10
染菌载体 inoculated carrier
已染上规定数量试验微生物的载体。
注：见附录F。
3.11
标定的微生物总数 nominal population
制造商标定的活的微生物数量。
注：一般以lg的函数来表达(如，106)。
3.12
包装系统 package system
无菌屏障系统和保护性包装的组合。
[ISO/TS 11139：2006，定义2.28]
3.13
初级包装 primary package
包装系统的一部分，用于维持产品的完整性。
注：保护染菌载体免受损坏和污染，而不阻碍灭菌因子穿透的系统。
3.14
过程挑战装置 process challenge device； PCD
对某一灭菌过程构成特定抗力的装置，用于评价该灭菌过程的性能。
[ISO/TS 11139：2006，定义2.33]
3.15
抗力仪 resistometer
为测量灭菌过程中产生的物理和/或化学参数相关组合而设计的测量设备。
3.16
次级包装 secondary package
装有已包装的生物指示物，供运输和贮存的包装系统。
3.17
自含式生物指示物 self-contained biological indicator
初级包装中含有试验微生物恢复生长所需培养基的生物指示物。
3.18
存活-杀灭区间 survival-kill window
在规定的条件下灭菌处理时，生物指示物从全部存活微生物(存活时间)过渡到全部杀灭微生物(杀灭时间)的暴露程度。
3.19
菌悬液 suspension
包含活的试验微生物的液体。
注：装在密封好的安瓿内的菌悬液可以作为一种生物指示物使用，菌悬液也可以是染菌载体或者生物指示物的中间体。
3.20
活菌量 viable count
实际可回收的菌落形成单位或其他合适单位的数量。
注：见附录A。
3.21
z值 z value
使D值变化一个数量级所需温度的数值。
注：见ISO 11138-3和ISO 11138-4。
4 生产通用要求
4.1 生产控制
4.1.1 质量体系
制造商应按照本部分建立、记录和持续运行一套完整的质量体系(例如ISO 13485、GMPS或国家其他要求)用以覆盖所有的操作要求。特别是制造商要在生产的各个阶段采取有效措施来降低对生物指示物产生的不良影响。
4.1.2 可追溯性
4.1.2.1 制造的组成成分的可追溯内容应保存。
4.1.2.2 制造的组成成分应包括掺入或直接接触试验菌悬液、染菌载体或其初级包装的所有材料和组成成分。
4.1.3 最终产品要求
最终产品应符合本部分的要求：
a) 生产(第5章)；
b) 标签(4.3)；
c) 抗力特性(6.4)；
d) 储存和运输(4.4)。
注：生物指示物的使用方法参见ISO 14161。
4.1.4 人员
本部分规定的步骤和方法应由经过专业培训和经验丰富的实验室人员来实施(见4.1.1)。
4.2 试验微生物
4.2.1 菌株
4.2.1.1 试验微生物应为被确定的菌株，来源于公认的菌种保藏机构，并能通过正确的检测方法进行确认。
4.2.1.2 试验微生物应为符合以下条件的菌株：
a) 试验微生物需用合适的方法来处理，不需要特殊保藏方法，不需要特殊的操作条件，不需要特殊的运输和邮递要求(例如世界卫生组织风险评估小组一组要求)；
b) 在规定的保质期内运输和储存，可以有效保持其菌株的抗力。
注：一般来说，生物指示物使用的试验微生物来自细菌芽孢。
4.2.1.3 除细菌芽孢外，试验微生物也可以是被证明对灭菌过程有合适抗力的微生物。
4.2.2 菌悬液的初始接种物
4.2.2.1 每批试验微生物悬液的最初接种物应符合以下要求：
a) 可追溯到公认的菌种保藏机构的标准菌株；
b) 验证其种类和纯度。
4.2.2.2 指定保存试验微生物菌种的方法应当能保证培养物不受污染，且引起其固有的性质发生变化的不利影响减少到最小。
4.2.2.3 制造商应记录和验证每株试验菌的详细确认检验。
4.2.3 试验微生物数量
4.2.3.1 对试验微生物悬液的活菌计数按照附录A的规定进行。
4.2.3.2 用户需要试验微生物生长指数情况时，应将有效试验微生物数表达为占显微镜检测所得细菌总数的百分比。
4.3 制造商提供的信息(标签)
4.3.1 每批菌悬液、染菌载体和生物指示物的标签上应有以下说明：
——可追溯生产过程的唯一性编号；
——试验微生物的名称；
——适合菌悬液、染菌载体和生物指示物的灭菌工艺；
——按照ISO 8601规定的方式标明失效期，例如，××××年××月××日；
——制造商的名称、商标、地址或其他识别方法；
在适当的地方使用国际公认的符号(见4.1.3和ISO 15223)。
4.3.2 每批产品的外包装应该包括表1中给出的信息。
4.3.3 标签使用的符号可参照ISO 15223的规定。
表1 制造商提供的信息
信息要求 菌悬液 染菌载体 生物指示物
提供试验微生物的菌种名称或缩写和该菌种的编号 必需 必需 必需
菌悬液的标称容积(mL) 必需 — —
产品适用过程、抗力以及影响抗力的操作过程和载体a 必需 必需 必需
详细的储藏条件 必需 必需 必需
处置方法 必需 必需 必需
使用指南，尤其是有关灭菌处理后用于恢复试验活菌的培养基和培养条件的数据 必需 必需 必需
每毫升试验微生物的数量(菌悬液)或每单位菌含量(染菌载体或生物指示物) 必需 必需 必需
次级包装中产品的数量 — 必需 必罱
参考本部分 必需 必需 必需
a 根据要求对制造商提供的抗力以及数量进行检测的方法。
4.4 储存和运输
4.4.1 应遵照试验微生物悬液的存储和运输条件，确保试验微生物悬液符合本部分和GB 18281的其他部分的要求。
4.4.2 对染菌载体的包装方式应不影响其标明的数量和每个染菌载体的性能。
4.4.3 应遵照染菌载体的存储和运输条件，确保染菌载体符合本部分和GB 18281的其他部分的要求。
4.4.4 单独包装的生物指示物应放入次级包装中才能进行运输和储存。用于运输和储存的包装应确保生物指示物符合本部分和GB 18281的其他部分的要求。
5 生产具体要求
5.1 菌悬液
5.1.1 合适的培养基和培养条件应能保证稳定地生产出符合本部分和GB 18281的其他部分性能要求的试验菌悬液。
5.1.2 菌悬液培养基应不影响试验微生物的稳定性，同时要与染菌载体和生物指示物制造工艺和材料相兼容。
5.1.3 收集及随后的处理方法应保证载体染菌时使用的菌悬液不含有对染菌载体或生物指示物的效能可能产生不良影响的培养基残留物。
5.2 载体、初级和次级包装
5.2.1 载体、内层和次级包装的材料应不得含有任何对生物指示物的性能产生不良影响的污染物(物理的、化学的或微生物的)。
5.2.2 载体、内层和次级包装以及特殊的储藏条件的标识应符合本部分要求，保证生物指示物在有效期内性能良好。制造商应向购买者提供每种载体尺寸的最大值和最小值。
5.2.3 在灭菌过程中或灭菌后，载体和初级包装应不得残留或释放任何物质到培养基，否则会抑制少量存活菌在培养条件下的生长。应按附录B进行试验，检查是否符合这一要求。
5.2.4 载体、初级和次级包装使用前应耐受预期的运输和处理，保证无破损。
5.2.5 用于载体和初级包装的原材料应能经受暴露于灭菌过程，以保证染菌载体和生物指示物性能在预期用途下稳定。应通过观察灭菌过程中载体和初级包装暴露于极限变化范围及其物理和化学变化的程度来检验是否符合标准。
注：相关的灭菌条件见GB 18281的其他相关部分。
5.2.6 生物指示物的制造商应研究灭菌条件，并对生物指示物灭菌条件的适用性进行测试。
5.3 染菌载体
5.3.1 制造染菌载体的材料应能经受暴露于灭菌过程中不会变形、熔化、腐蚀或其他损坏，从而影响染菌载体的使用。
5.3.2 除非制造商已经证明多个菌种的使用不会严重影响在特殊灭菌过程中试验微生物的性能，否则只能采用同一株试验微生物，制备一批染菌载体。
5.3.3 接种前，需要依据ISO 17665-1、ISO 11135、ISO 11137的相关灭菌方法，对载体进行灭菌。如果灭菌不可行，接种前应依据ISO 11737-1建立可接受的生物负载量限度要求(见附录B)。
5.3.4 载体的接种应保持一致的微生物数量。
5.4 生物指示物
5.4.1 应把单个载体分别装入初级包装内作为生物指示物。
5.4.2 预期适用的初级包装应被确认(见附录B)。
5.4.3 包装应符合国际标准或国家标准(见ISO 11607-1和ISO 11607-2)。
5.5 自含式生物指示物
自含式生物指示物的性能应经过验证，其中包括经过灭菌过程后试验微生物在培养基中的恢复能力。
